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便攜式葉綠素測定儀對多種葉綠素的提取
葉綠素的提取: 將材料去脈剪碎(約1—2mm 見方) , 隨機取樣, 準確稱重取015g (精確到0.1mg) , 放入50mL 比色管中, 分別加入上述三種提取液25mL; 另稱0.5g 樣品, 加6mL 雙蒸水和少量CaCO3, 勻漿, 定容至25mL , 過濾, 取2.25mL 濾液放入50mL 比色管中, 加23.75mL 丙酮2乙醇(2∶1) , 使之成為95% 丙酮2乙醇勻槳提取液。比色管加塞放置于25℃生化培養(yǎng)箱內(nèi)暗中提取葉綠素。每種提取方法重復(fù)3 次。
葉綠素提取液吸收光譜的測定: 用分光光度計在600—700nm 范圍內(nèi)對不同葉綠素提取液進行掃描, 波長精度為0.2nm。
葉綠素含量測定: 分別以提取溶劑作空白, 測定葉綠素提取液吸光度A 645、A 663, 利用A rnon 公式:
葉綠素a 濃度(mg?L ) : Ca= 12. 7A 663- 2. 69A 645;
葉綠素b 濃度(mg?L ) : Cb= 22. 9A 645- 4. 68A 663;
葉綠素總濃度(mg?L ) : Ca+ b= Ca+ Cb。
計算提取液中葉綠素濃度, 換算為每克鮮葉葉綠素含量(mg?g 鮮重)。
結(jié)果與討論
1 葉綠素提取液的吸收光譜
種葉綠素提取液的吸收光譜在600—700nm 范圍內(nèi)基本相似(圖1) , 說明4 種葉綠素提取液的光吸收性質(zhì)基本相似, 可以用A rnon 公式進行葉綠素含量的計算。
2 不同提取溶劑對葉綠素提取總量的影響
不同提取溶劑對葉綠素提取總量有著明顯的影響(表1) , 95% 丙酮2乙醇提取的葉綠素總量最高, 高于傳統(tǒng)的80% 丙酮提取法29.5% ,95% 乙醇提取的葉綠素總量亦比80% 丙酮法高9.5%。95% 丙酮2乙醇提取葉片勻漿的葉綠素總量與提取葉片碎片的葉綠素總量沒有顯著差異。
3 不同提取溶劑提取葉綠素的進程
不同提取溶劑提取葉綠素速度差異較大, 提取完全程度也不同(表1)。提取速度最快的是95%丙酮2乙醇, 葉綠素經(jīng)過8h 已經(jīng)基本提取完全, 葉片碎片變白; 其次是95% 乙醇, 而80% 丙酮提取速度最慢, 后兩者在24h 內(nèi)沒有完全提取出葉綠素。從提取速度來看, 95% 丙酮2乙醇要優(yōu)于95%乙醇和80% 丙酮。葉片勻漿后用95% 丙酮2乙醇在015h 就已經(jīng)提取完全, 大大加快了葉綠素提取速度。
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